防止菌种衰退的措施有哪些

　　这篇内容会给农资从业者们剖析一下“防止菌种衰退的措施有哪些”的内容进行细致诠释，但愿对农资人们有一些帮助，下面开始阅读吧！

　　控制菌种的传代次数。创造良好的培养条件。使用不易衰退的细胞进行移和传代。采用有效的菌种保存方法保存。定期分离纯化菌种。采用正确的菌种选育技术进行培育。

好文探索：常见微生物菌种衰退原因及预防

　　微生物长期受到外界的影响，遗传性状必然发生某些变异。正是由于变异的存在才使得生物向前进化。

　　然而由于突变的存在，菌种在培养或保藏过程中，可能会出现某些优良生产性状的劣化、遗传标记丢失、典型特征改变等现象，称为菌种衰退。比如苏云金芽孢杆菌由于菌种衰退，导致其新生的菌体芽孢和伴孢晶体都比较小。保藏的沙门氏菌鞭毛抗原丢失，导致H多价血清不凝固等。

　　菌种衰退的根本原因是有关基因的负突变。如果控制产量的基因发生负突变，则表现为产量下降。如果控制孢子生成的基因发生负突变，则产生孢子的能力下降。

　　菌种在移种传代过程中会发生自发突变。虽然自发突变的几率很低(一般为10-6~10-9)，尤其是对于某一特定基因来说，突变频率更低。

　　但是由于微生物具有极高的代谢繁殖能力，随着传代次数增加，衰退细胞的数目就会不断增加，在数量上逐渐占优势，最终成为一株衰退了的菌株。 菌种衰退还有以下几种原因：。

　　表型延迟现象也会造成菌种衰退。

　　如，在诱变育种过程中，经常会发现某菌株初筛时产量较高，进行复筛时产量却下降了。

　　质粒脱落导致菌种衰退的情况在抗生素生产中较多，不少抗生素的合成是受质粒控制的。

　　当菌株细胞由于自发突变或外界条件影响(如高温)，致使控制产量的质粒脱落或者核内DNA和质粒**不一致，即DNA**速度超过质粒，经多次传代后，某些细胞中就不具有对产量起决定作用的质粒，这类细胞数量不断提高达到优势，则菌种表现为衰退。

　　连续传代是加速菌种衰退的一个重要原因。

　　一方面，传代次数越多，发生自发突变(尤其是负突变)的几率越高。另一方面，传代次数越多，群体中个别的衰退型细胞数量增加并占据优势越快，致使群体表型出现衰退。

　　不适宜的培养和保藏条件是加速菌种衰退的另一个重要原因。

　　不良的培养条件如营养成分、温度、湿度、pH值、通气量等和保藏条件如营养、含水量、温度、氧气等，不仅会诱发衰退型细胞的出现，还会促进衰退细胞迅速繁殖，在数量上大大超过正常细胞，造成菌种衰退。

　　采用已衰退菌种进行生产会影响生产效率，而把已衰退菌种作为阳性菌株进行检验，则会影响检验正确率。

　　既然变异是不可避免的，那么我们应该如果避免菌种衰退呢。

　　尽量避免不必要的移种和传代，把必要的传代减少到最低的水平以减少突变几率。传代次数越多，产生突变的几率就越大，菌种发生衰退的机会就越高。

　　在实验室检验或者是生产实际中，应严格控制传代次数。中国药典当中规定，培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，以防止菌株因传代次数过多引起衰退影响检验。

　　2、利用不同类型细胞进行接种传代。

　　放线菌，霉菌用菌丝进行移种比分生孢子容易衰退，因菌丝是对核且有异核存在，所以移种霉菌适宜采用孢子。

　　不良的培养条件会衰退细胞的出现，因此采用适宜的培养基进行菌种培养，以减少衰退几率。

　　根据保存时间的长短，选择适宜的保存方法。

　　传代培养法：复苏后的第一代放于4℃冰箱或室温保存，定期传代培养。保藏时间依微生物种类而定。

　　如，芽孢、霉菌、酵母菌保存6个月转一次，普通细菌1个月转一次，假单胞菌2周转一次。

　　甘油冻存法：将复活后经过性能确认的菌株新鲜培养物（一般是第二代菌株），用0.85%的灭菌生理盐水（约1-2ml）洗斜面菌苔成菌悬液。将上述菌悬液吸取适量于灭菌管（冻存管）中（如，灭菌管容量为5ml，则取1.5ml菌液），加入等体积的40%灭菌甘油，混匀，密封。保藏温度为—20℃，一般可保存1-2年。

　　瓷珠保存管保存：菌株保藏管内含特制的小珠（20-25颗）和特殊溶液，只需将培养好的菌株接入溶液中，摇匀成菌悬液，细胞即吸附于小珠上，然后吸出溶液，将保藏管置-70℃可保存5年，置-20℃可保存2-3年。

　　第一步：对需要保存的菌株进行必要的纯化，挑取生长旺盛时期的菌落，接入菌株。

　　保藏管中，通常需要接入4-7环，对于苛养菌应多接一些。

　　第二步：拧上盖子，充分剧烈震荡。

　　第三步：用无菌吸管将溶液吸走，尽可能吸干。

　　第四步：马上放入冰箱中，温度越低越有利于保存（推荐使用-70℃超低温冰箱）。

　　第五步：复苏时，只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。

精选问答：

　　1、灵芝菌种的种植技术？

　　1.1 椴木选伐

　　 椴木以壳斗科树种较理想，一般来说凡是适于香菇、木耳栽培的树种，也能用于灵芝菌椴木栽培。要求树皮厚实，形成层发达，不易与木质部剥离 ；木材容重比较大，材质较硬实；汉中一般在 11 月下旬至翌年 1 月中旬采伐椴木，树木直径要求 6~20 cm ，直径过大者，可辟材做料，备材 375~450 t/hm 2 。

　　 1.2 接种时间

　　 汉中接种时间一般安排在 12 月下旬至翌年 1 月中旬，此期汉中气温低、少雨、空气干燥，感染率低，接种成活率高，最为理想。 4 月初气温稳定在 20 ℃ 以上，可埋菌棒使灵芝原基慢慢生长，经过 15 d 时间发菌，为子实体正常生长提供了营养供应，年内可收获 1~2 潮灵芝。

　　 1.3 菌种准备

　　 汉中目前主要品种为赤芝 1 号，盖大、肉厚、色泽亮，感染率低，产量高，备种量为 30 t/hm 2 。

　　2 截椴装袋及蒸汽灭菌

　　 将原材截成 30 cm 长的短椴木，直径超过 20 cm ，辟开材树皮朝外，用利刀修光断面、枝叉面，以免剌破袋膜，引起感染杂菌。

　　 将菌袋按排叠放，排间留有 20 cm 的空隙，采用一层横排一层竖排“井”字形叠放，排放好底层覆盖农膜，外层再盖1 层彩条布，四周用沙袋将农膜及彩条布压实，防止漏气。当温度达到 100 ℃ 后，持续 10 h 不间断加热 ，灭菌结束后，闷3~5 h ，等灶内温度下降到 60 ℃ 以下，取出菌袋放入接种棚 。

　　 3 菌袋接种

　　 汉中地区多采用开放式接种，一般在 1 月下旬进行，先将菌种足量放入棚内（按每袋菌棒 0.25 kg ），再用二氯异**酸钠消毒粉（保菇灵）进行棚内灭菌， 30.0 m×4.0 m×2.5 m 大棚用量为 20 包，灭菌 4~5 h 。接种人 员进入时用酒精喷雾灭菌， 8 人为一组，日接种 20 t ，采用两端断面接种，先脱袋接种袋底菌种，再接种袋口，每袋用种 0.20~0.25 kg 。

　　 4 养菌管理

　　 先将养菌棚消毒杀菌，再将菌袋按“井”字形分层堆叠在农膜上，高度不宜超过 1.5 m ，外层覆盖农膜，保持温湿度，温度控制在 20~25 ℃ 之间即，可使菌丝快速定植、生长，灵芝菌丝从轴向长满椴面 ，同时向韧皮部、形成层、维管束生长。棚内保持空气新鲜，每天中午要通风 1~2 h 促进菌丝生长 。

　　 5 搭棚埋棒

　　 芝场要选择地势开阔、交通便利、排灌方便的地块。搭建复式栽培棚，即外层遮阳棚和内层塑料大棚，建塑料大棚，采用钢管在地基上弯拱后，再覆盖塑料薄膜，棚高 2.5 m 、长 30 m 、宽 4 m 。每棚做畦 2 行，畦宽1.5 m 、高 0.2 m 、长 30 m ，畦间留 30 cm 走道。菌袋内菌丝长满椴木，呈 红褐色菌被，有少量菌原基突出，即可埋棒

　　2、平菇菌袋怎样码才透气而且不容易倒？

　　堆积码放，但是码放的层数不要超过4层，否则会容易栽培袋变形的。各层之间必须有木板隔开，放一层再用木板隔一层，使之架空，不能够直接压在下面的栽培袋上面。

　　　　平菇发菌常见问题

　　　　一、菌丝不发菌，不吃料

　　　　1、发生原因

　　　　培养料变质，孳生大量杂菌；培养料含水量过高或过低；菌种老化，生活力弱；菌种用量过少；环境温度过高或过低，加石灰过量，pH值偏高。

　　　　2、解决办法

　　　　使用新鲜无霉变的原料，应用前应在阳光下晒1-2天，生料生产的要堆积发酵2-3天，熟料生产的要严格灭菌；配料时可在培养料中参加一些杀菌剂以克制杂菌生长，常用的有多菌灵，应用浓度节制在0.10%-0.15%；料的含水量控制在60%－65%，以手紧握料指缝间有水珠不滴下为度；选择健壮、种性纯、菌龄适宜的菌种（菌龄30—35天）；适当加大播种量以培养料干重的12%－15%为宜；发菌期间棚温保持在20℃左右，料温25℃左右为宜，温度宁可稍低些，切勿过高，严防烧菌；在配制培养料时，严格掌握控制石灰或过磷酸钙的用量，尤其气温较低时添加量不宜超过1%，pH值7—8为宜。

　　　　二、平菇菌块不萌发

　　　　平菇接种后菌块出现不长杂菌也不萌发、菌丝变黄枯萎等现象，应及早采取措施预防。

　　　　1、主要原因

　　　　一是菌种老化，生活力弱；二是接种时菌块被酒精灯火焰或接种工具烫伤；三是遇高温天气菌种受高温伤害出现烧菌；四是原料处理不当，没有平晒，由各种微生物产生的有害化学毒素存在于培养基中；五是装瓶或装袋后没有及时灭菌，培养料发酸或发臭，产生大量的抑菌物质；六是石灰加入过量，使培养基碱性过高；七是原料中松杉柏木屑较多，芳香油等抑菌物质含量高；八是培养料中加入过多的**素等化学肥料，使培养料中氨气太重，抑制了菌种的萌发。

　　　　2、预防措施

　　　　使用适龄菌种，菌龄在20～25天菌丝活动力较旺。高温天气安排在早晨或夜间接种，培养室加强通风降温或适当推迟培育时间，避免高温伤害。接种时避免烫伤菌丝。配料时适当增加石膏的用量，装瓶装袋后及时灭菌。石灰用量不能过大，一般为2％左右。选用晒干无霉烂的原料，混有松杉柏木屑的原料应自然堆放6个月以上，经日晒雨淋除去芳香油类抑菌物质。根据所选材料加入适量化学肥料，**素添加量不超过0.1％。

　　　　三、培养料酸臭

　　　　1、发生原因

　　　　培养料陈旧，带有大量杂菌；发菌期间遇高温未及时散热降温，细菌大量繁殖，料发酵变酸，**变臭；料中水分过多，空气不足，厌氧发酵导致料腐烂发臭。堆温过高，菌丝生长不良，杂菌趁机大批繁殖；拌料时加入了过多的**素产生了游离氨气。

　　　　2、解决办法

　　　　陈旧的棉子壳或代料在配料前应在太阳下暴晒2－3天，并在拌料时加入0.1-0.2%多菌灵；如备料时发现培养料有酸臭味，要将料倒出，摊开晾晒后添加适量新料再继续进行发酵，重新装袋接种；拌料时应控制用水；已污染的料应及时挖除，用2%明矾水拌匀除臭；如料已腐烂变黑，只能废弃作为肥料用。

　　　　四、菌丝萎缩

　　　　1、发生原因

　　　　料袋堆垛太高，发酵时未及时倒垛散热，料温升高达35℃以上烧坏菌丝；料袋大，装料多，温度过高通风不良；料过湿装得太实，透气不好，菌丝缺氧也会出现菌丝萎缩现象。

　　　　2、解决办法

　　　　改善发菌场地环境，注意通风降温；料袋堆垛发菌，气温高时，堆放2—4层，呈“井”字形交叉排放，便于散热；料袋发酵放热期间及时倒垛散热；拌料时掌握好料水比，装袋时做到松紧适宜；装袋选用的薄膜筒宽度不应超过25厘米，避免装料过多发酵温度过高。

　　　　五、袋壁布满豆渣样菌苔

　　　　1、发生原因

　　　　培养料含水量大，透气性差，引发酵母菌大量孳生，在袋膜上大量聚积，料内出现发酵酸味。

　　　　2、解决办法

　　　　用直径1厘米削尖的圆木棍在料袋两头往中间扎孔2—3个，深5—8厘米，以通气补氧,不久，袋内壁附着的酵母菌苔会逐渐自行消退，平菇菌丝就会继续生长。

　　　　六、霉菌污染

　　　　平菇上的杂菌绿霉、木霉、毛霉、青霉、曲霉等，生产中感染最多的是绿霉。杂菌感染后，与平菇菌丝争夺养分，轻则造成减产，重则造成绝收。 在实际生产中，必须从原料准备到菇棚处理的各个环节都要严格消毒灭菌，减少杂菌感染的机会。

　　　　1、发生原因

　　　　培养料或菌种本身带菌；发菌场地卫生差或老菇房没有彻底消毒；菇棚高温高湿不通风。

　　　　2、解决办法

　　　　选用新鲜、无霉变、经暴晒的培养料，发酵要彻底；避开高温期播种，加强通风，防止潮湿闷热；选用优质、抗霉，吃料快的菌种；霉菌污染发现早，面积小时，可用pH值10以上的石灰水注入被污染的培养料，同时搬离发菌场，单独发菌管理。对污染严重的则清除出场，挖坑深埋处理。

　　　　（1）选用新鲜无霉变的原料，拌料前曝晒2—3天。

　　　　（2）选用抗病、高产、无杂菌污染的菌种，加大菌种用量，将菌种用量加大到30%。

　　　　（3）拌料时使石灰用量加大到5%，加入0.1—0.2%多菌灵，或0.5%--1%盐。

　　　　（4）采用熟料或高温发酵料栽培。

　　　　发酵时间的长短及翻堆次数，要根据气温灵活掌握，高温季节每2天翻堆1次，发酵6—7天，低温季节每3天翻堆1次，发酵8—10天，如用隔年的陈料，应缩短堆制发酵时间，比如用隔年陈棉皮为原料（配方88%棉皮+10%麸子+1%石膏+1%蔗糖）堆积发酵3天最好，料温高，则各类高温微生物的活动增强，用这种发酵料栽培平菇出菇早，产量高，如发酵时间超过5—7天，料温降低，放线菌随温度降低数量依次递减，而某些霉菌活动增强，用这种发酵过头的培养料，平菇菌丝生长缓慢，产量下降。

　　　　翻堆时要注意堆表皮125px的料，堆中心料与中间料位置互换，使所有培养料都在堆制中达到60—70度高温，达到彻底杀菌的目的。发酵时间，翻堆次数要灵活掌握，以最终发酵好的培养料手握柔软有弹性，有发酵香味，没有刺鼻臭味，能看见少量白色放线菌丝为好。

　　　　（5）控制培养料含水量在60—70%为宜，避免过湿发菌。

　　　　发酵好的料，及时装袋，装袋时检查培养料的含水量，以60—70%为好。过干加石灰水，过湿，可加入适量生石灰进行调整。装好袋发菌时，掌握空气相对湿度60%—70%，要在通风良好，空气偏干的环境发菌。当地可以露天发菌，也可在闲置屋里或棚内发菌，但是一定要注意通风，尤其是在棚内发菌可先不盖棚膜，以避免空气相对湿度过大。

　　　　（6）袋两端打孔增氧，通风透气。

　　　　（7）发菌期袋温应控制在20—25度，最高不能超过28度，发菌一般需20—30天，在此期间，随时注意观查料温，通过倒堆，控制袋温在20—25度，避免出现30度以上的高温引起烧菌或烧料。

　　　　（8）保持环境卫生。菇棚使用前必须清除残留的培养料，垃圾等污染源，并用10%的石灰水涂刷墙、棚顶及地面，或用2—3%的甲醛液喷雾，或每立方米空间用5克硫磺薰蒸，同时，喷0.4%DDV或0.2%的乐果杀灭害虫。进料前，棚内地面和墙上都要撒上生石灰面。

　　　　七、发菌后期吃料缓慢，迟迟长不满袋

　　　　1、发生原因

　　　　装料过紧或菌袋两端扎口过紧，料中氧气不足或料发酵产生二氧化碳等有害气体积累过多，抑制了菌丝生长；遇低温天气，积温不够。

　　　　2、解决办法

　　　　装袋应松紧适宜，扎口不宜过紧，或用针在接种部位扎些通气孔；遇低温，应采取保温措施，减少通风换气次数。

　　　　八、软袋

　　　　一般袋料表面长有菌丝，但袋内菌丝少，且稀疏不紧密，菌袋软而无弹性。

　　　　1、发生原因菌种退化或老化，生活力减弱；高温伤害了菌种；添加氮过多，料内细菌大量繁殖，抑制菌丝生长；培养料含水量大，氧气不足，影响菌丝向料内生长。

　　　　2、解决办法使用健壮、优质的菌种；适温接种，防高温伤菌；培养料添加的氮素营养适量，切勿过多；发生软袋时，降低发菌温度，袋壁刺孔排湿透气，适当延长发菌时间，让菌丝往料内长足发透。

　　　　九、菌丝未满袋就出菇

　　　　1、发生原因

　　　　菌种用量过大；菌种太老，老菌块提前进入生殖生长，未等菌丝完全发满就出菇；发菌场地光线过强，低温或昼夜温差过大**出菇；袋口松开过早；在菌袋中部产生该现象是由于装料不紧，留有空隙加之见光，就会产生子实体。

　　　　2、解决办法

　　　　控制菌种用量在12%－15%；选用菌龄适宜菌种；注意避光和夜间保温，改善发菌环境，在接种后25-30天内尽量少见光；待菌丝发满后再打开袋口；装袋时利用木棒压紧。