农药抑制羧酸酯酶的方法是 羧酸酯酶抑制剂有哪些

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什么是酶抑制测定方法？

1．胆碱酯酶（ChE）抑制法

有机磷和氨基甲酸酯两类农药能抑制生物体内AChE的活性。据此，利用离体AChE与食品中残留农药作用，AChE受抑制的程度不同，底物被酶水解量不同，造成颜色变浅或不显色，据此计算农药残留量。常用的酶源有牛、猪等家畜的肝脏酯酶、人血浆或血清、马血清、蝇或蜜蜂头部的脑酯酶、兔或鼠的羧酸酯酶等。按此原理设计的测试方法主要为酶液比色法和纸片速测卡。

（1）酶液比色法。从敏感家蝇品系的头部提取AChE，在人工控制条件下与系列浓度的对硫磷作用，以碘化硫代乙酰胆碱（ATCT）为底物，以5，5－二硫代-2，2－二硝基苯甲酸为显色剂，经一定时间后在410nm波长的可见光上进行比色。根据吸光值，计算AChE被抑制的程度，并以不加酶试管做空白对照。酶活性百分率按下式进行计算。

作为一种离体酶在试管中进行反应，应严格控制反应温度、最佳反应时间、酶与底物的反应浓度及周围环境的pH等条件。

（2）速测卡法。农药残留速测卡是55mm2mm的长方形纸条，上面对称贴有直径15mm的白色、红色圆形药片各一片。白色药片中含有从牛血清中提取的胆碱酯酶，红色药片中含有乙酰胆碱类似物2，6－二氯靛酚（蓝色）和乙酸。如果有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，会抑制胆碱酯酶的活性而不发生水解反应，无蓝色物质生成。试验时首先在蔬菜叶面滴2滴洗脱液（磷酸缓冲液pH7.5），用白色药片在滴液处轻轻涂擦放置10min进行预反应，将速测卡向内对折，用手指捏紧3min，使白色药片与红色药片紧密接触反应，打开速测卡，若白色药片变为蓝色，为阴性，若不变色，表示有机磷、氨基甲酸酯类农药的存在。

胆碱酯酶抑制法的优点是能对抑制胆碱酯酶的农药品种进行快速灵敏地检测，前处理简单，检测时间短（酶液比色法约40min），适用现场测定。缺点是使用的酶、基质、显色剂有一定的特异性，需控制的条件比较多。另外，对其他类型农药造成的污染无法检出，以及对某些硫磷酸酯类农药（如优杀磷）灵敏度不高，对这类农药造成的污染可能会漏检或误检。 如将胆碱酯酶抑制技术与生物测定法相配合，可在短时间内将超毒蔬菜从众多蔬菜样本中筛选出，并可区分菊酯与有机磷、氨基甲酸酯类农药造成的污染。

2．植物酯酶（phytoesterase）抑制法

该方法的原理是利用植物水解酶水解2，6－二氯乙酰靛酚，根据反应溶液在水解前后颜色的变化，用眼睛或仪器辨别农药对酶的抑制程度。在有机磷或氨基甲酸酯类农药存在时，植物水解酶的活性受抑制，靛酚的蓝色变浅。植物酶法在测定过程中无需使用有机溶剂，预处理方法简单，测定速度快，成本低廉，因此也有一定的应用价值。

3．有机磷水解酶（OPH）法

有机磷水解酶是一种广泛存在于多种生物体内的由有机磷降解酶基因（opd）编码的酯酶。存在于微生物体内的有机磷水解酶能够切断有机磷化合物的磷酸酯键（P-O和P-S键）来解除有机磷化合物的毒性。如王银善分离到一菌株PseudomonasWs-5对甲胺磷有很强的降解能力。 OPH主要用于化学武器和一些过期的有机磷杀虫剂的销毁，接触毒剂人员和物品的防护与洗消及中毒人员的救治。将OPH固定在电极表面制成生物传感器，能够进行现场快速检测有机磷农药残留。OPH水解有机磷化合物具有反应特异高效（酶水解的效率为化学水解的40～2450倍）、反应条件温和、无刺激性、固化酶易储存、用量小、成本低等优点，有着较好的应用前景。

请问 有机磷农药的检测有哪些方法,哪些又是最新的方法

在检测技术方面，方法有很多，主要有酶抑制法、酶联免疫法、光度法、色谱法及质谱法等。目前国际上已普遍采用多残留检测技术。这些方面的建立得益于气质联用（GC-MS）、液质联用（LC-MS）技术的应用以及常规使用的气相色谱仪（GC）、液相色谱仪（LC）技术上新的突破，并提高农药定性定量、多农残检测、快速检测等方面发挥着巨大的作用，色谱法以成为目前检测的主流仪器。

2.1 酶抑制法

酶抑制法是利用杀虫剂可以抑制乙酰胆碱酯酶或是羧酸酯酶的活性的原理而建立的，即乙酰胆碱酯酶或羧酸酯酶与样品反应，若酶的活性受到抑制，则表示该类杀虫剂的存在。因为酶的活性与杀虫剂的含量有关，测定酶活性的抑制率，即可得杀虫剂的残留量。应用抑制原理快速测定法只能判断是否有过高的有机磷和氨基甲酸酯农药，而不能判断超标的具体农药品种和残留量，因此只能作为快速测定方法。

2.2 酶联免疫测试法

酶联免疫检测法是利用化学药物在动物体中有促进其产生免疫抗体的原理，将某种农药与大分子化合物的复合体注入实验动物体内，使其对该种农药产生抗体，然后将抗体的抽取物与蔬菜样品农药残留抽取物进行离体试验，以比色的方式确认农药的残留量。这种结果精确、灵敏度高、特异性强，可采用试剂盒检测。 在实际应用中，农药种类繁多，制备抗体的难度较大，具有一定的盲目性。

2.3 气相色谱及其联用技术

气相色谱是一种简易、快速、高效和灵敏的现代分离分析技术，是农药残留测定不可或缺的手段，由于农药的种类很多，不同类型的农药，结构差异很大，而每一种检测器仅能对一类或几类原子和官能团进行响应，因而不同类型的农药常常需要采用不同类型的检测器，加上农药的残留一般都比较低，所以检测器的选择十分关键，如分析有机氯和拟除虫菊酯类农药采用电子捕获检测器（ECD）、分析有机磷农药采用火焰光度检测器（FPD）、分析含氮农药和氨基甲酸酯类农药采用氮磷检测器（NPD）。高灵敏的检测器可以检出1×10-10～1×10-12g的组分，适合农药微量和痕量分析。

气相色谱—质谱联用技术发挥气相色谱的高分离能力，又可发挥质谱法的高高鉴别能力，适用于多组分混合物中未知组分的定性鉴定，简化了多农残检测的分析步骤，而采用SIM模式仅对待测组分的定性离子进行采集，减少了杂质峰的干扰，提高了灵敏度。

2.4 液相色谱及其联用技术

相对于GC，液相色谱的适用性更广，可分析高沸点、热不稳定、非挥发性化合物。液相色谱质谱联用（LC-MS）对分析技术和仪器的要求高，具有检测灵敏度高、选择性好、定性定量同时进行、结果可靠等优点。但液相色谱与质谱之间的接口技术比较复杂，因此LC-MS在检测农药残留方面落后于GC-MS。由于目前LC-MS接口技术还没有真正地实现标准化，加之LC-MS对操作者的水平和仪器要求比较高，因此它在农残检测方面没有GC-MS普及。但LC-MS的飞速发展已成为发达国家在各种基质中微量极性农药检测手段。在多农残残留分析中，LC-MS技术使用最多的是四极质量分析器。由于质谱仪通用性，LC-MS在多种类多成分的农药残留检测中越来越广泛，如我国标准GB/T -2025建立的粮谷中372种农药残留的LC-MS方法和国外环境样品中多农残分析。

3.CTI华测检测农药残留测试服务

CTI华测检测作为食品检测领域权威第三方检测机构，在诸多农残检测技术具有国际先进检测技术，同时获得中国合格评定国家认可委员会（CNAS）和国家计量（CMA）资质认可。华测检测可提供各国标准的农药残留检测服务，助您的产品通往日本、欧美顺利通关。根据企业的不同需求，华测检测农药残留测试服务如下：水胺硫磷、氧化乐果、克百威等约500种农药残留扫描，多农残检测324项（应对日本“肯定列表制度”），应对日本通过检测项目248项，日本厚生省57项有机磷农药列表测试服务，中国与欧盟常见农药185项，l 34项高毒农药一齐分析

农药生物活性的改变是怎样的？

农药混用后对害物的毒力变化有3种可能：

1．相加作用

即农药混用后对有害生物的毒力等于混用中各单剂农药单独使用时毒力之和。例如甲萘威和灭杀威按1∶1混合时对黑尾叶蝉的毒力（LD50）为51.6μg/g，而甲萘威和灭杀威单独使用时对黑尾叶蝉的毒力（LD50）分别为44.8μg/g和59.0μg/g，这是典型的相加作用。又如氰戊菊酯和久效磷按1∶1混合时对黏虫3龄幼虫的毒力（LD50）为0.0019μg/头，而氰戊菊酯和久效磷单独使用时对黏虫3龄幼虫的毒力（LD50）分别是0.00086μg/头和0.082μg/头，其共毒系数为88.5，也是相加作用。

2．增效作用

即农药混用时对有害生物的毒力大于各单剂单用时的毒力总和。例如，马拉硫磷和残杀威按1∶1混用时对黑尾叶蝉的毒力（LD50）为20μg/g，而单独使用马拉硫磷和残杀威对黑尾叶蝉的毒力分别为288μg/g和263μg/g，呈现显著的增效作用。又如鱼藤酮、氰戊菊酯对柑橘锈红蜘蛛的毒力（LC50）分别为0.208mg/L和33.114mg/L，二者按4∶1混用后对柑橘锈蜘蛛的毒力（LC50）为0.038mg/L，共毒系数为677.5，增效作用明显。

3．颉颃作用

即农药混用时对有害生物的毒力低于各单剂单用时毒力的总和。例如，以3龄黏虫幼虫为试虫，单用甲氰菊酯的毒力（LD50）为0.002μg/头，单用甲萘威的毒力（LD50）为0.289μg/头，而甲氰菊酯和甲萘威按1∶8比例混用时，其毒力（LD50）为0.0503μg/头，计算出共毒系数为33.1，显示某种程度的颉颃作用。又如混灭威对5龄黏虫幼虫的毒力（LD50）为20.48μg/g，而和等量的植物杀虫剂苦皮藤素（无直接杀虫作用）混用后，毒力为75.04μg/g，表现出明显的颉颃作用。

农药混用后对哺乳动物的毒性同样有增毒作用、相加作用和颉颃作用。在农药混剂或现场混用中，如果表现出增毒作用，这种混配混用也是不可取的。典型的例子是杀菌剂异稻瘟净（亦有较弱的杀虫作用）和杀虫剂马拉硫磷混用，虽然对黑尾叶蝉表现明显的增效作用，但因对哺乳动物的毒性亦明显增大，因而不能被开发为混剂使用。增毒的原因可能是异稻瘟净抑制了哺乳动物体内对马拉硫磷起主要解毒作用的羧酸酯酶的活性。据研究，久效磷、苯硫磷、稻瘟净等对哺乳动物体内的羧酸酯酶的活性有强烈的抑制作用，因而可以预测，这几种有机磷杀虫、杀菌剂和马拉硫磷混用后会表现增毒作用。

农药混用后生物活性的改变还涉及对被保护对象的安全性，特别是杀菌剂之间混用、除草剂之间混用，或杀虫杀菌剂和除草剂混用都有可能对作物造成药害。众所周知的例子是除草剂敌稗和有机磷或氨基甲酸酯类杀虫剂混用后会对水稻产生药害，其原因是这两类杀虫剂可能抑制水稻体内赖以对敌稗解毒的芳酰胺酶的活性。