乙草胺对大姜有多大害处

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1、氧氟甲戊灵除草剂使用方法？
旱稻，水稻旱育秧田：每亩用33%二甲戊灵乳油150-200毫升，兑水15-20千克，播种后出苗前表土喷雾。

直播棉花：每亩用33%二甲戊灵乳油150-200毫升，兑水15-20千克，播种前或播种后出苗前表土喷雾。因北方棉区天气干旱，为了保证除草效果，施药后需混土3-5厘米。

玉米：（1）东北地区春玉米每亩用33%二甲戊灵乳油200-300毫升，兑水15-20千克，播种后出苗前表土喷雾。施药应在播种后5天内进行，施药过晚容易对玉米产生药害。（2）夏玉米每亩用33%二甲戊灵乳油150-200毫升，兑水15-20千克，播种后出苗前表土喷雾。华北地区免耕播种的夏玉米，播种后先浇蒙头水，浇水后2天内施药，施药过晚易产生药害。

大豆、花生：（1）春大豆、春花生，每亩用33%二甲戊灵乳油200-300毫升，兑水15-20千克，整地后施药混土，然后播种。（2）夏大豆、夏花生，每亩用33%二甲戊灵乳油150-200毫升，兑水15-20千克，播种后1-2天表土喷雾，施药过晚易产生药害。

马铃薯：亩用33%二甲戊灵乳油150-200毫升，兑水15-20千克，播种后出苗前表土喷雾。

直播蔬菜田：大蒜、姜、胡萝卜、辣椒、韭菜、小葱、洋葱、芹菜、芫荽等直播田，亩用33%二甲戊灵乳油100-150毫升，兑水15-20千克，播种覆土后，表土喷雾。

移栽蔬菜田：辣椒、西红柿、韭菜、大葱、洋葱、芹菜、菜花、白菜、甘蓝、茄子等移栽田，亩用33%二甲戊灵乳油100-150毫升，兑水15-20千克，移栽前1-2天表土喷雾。

油菜田：移栽油菜田，亩用33%二甲戊灵乳油150-200毫升，兑水15-20千克，移栽前1-2天表土喷雾。

韭菜：老韭菜在收割伤口愈合后，亩用33%二甲戊灵乳油100-150毫升，兑水15-20千克，均匀喷雾。

烟草：在烟草全田烟株50%以上中心花开放式进行打顶，并摘除长于2厘米的腋芽，打顶后24小时内用杯淋法施药。每株用稀释80-100倍液后的药液15-20毫升从烟株顶部林下，施药1次，确保每个腋芽处能接触药液。也可以用于烟草田杂草处理。

拓展好文：乙草胺对斑马鱼幼鱼早期发育阶段甲状腺相关基因的影响

　　近年越来越多的研究表明，多种农药能对机体的甲状腺内分泌产生干扰作用。例如，暴露于**酮(triadimefon)[]、丁草胺(butachlor)[]、己唑醇(hexaconazole)及戊唑醇(tebuconazole)[]中均会改变斑马鱼幼鱼甲状腺激素T3、T4的浓度，并影响促甲状腺激素(tsh)、脱碘酶(d1)及甲状腺激素受体(trβ)等相关基因的表达；暴露于三氟氯氰菊酯(cyhalothrin)中可降低淡水鲶鱼体内甲状腺激素含量[]；暴露于久效磷(moncrotophos)

　　中能引起金鱼甲状腺病理学变化，并使其甲状腺激素T3含量下降[]。

　　乙草胺(acetochlor)自1971年问世以来，已在世界范围内得到广泛应用[]，是我国目前使用量最大的3种除草剂之一[,]。随着其大量使用，残留在土壤中的乙草胺随着雨水的淋溶作用等进入江河、池塘等地表水，加上其相对稳定的累积作用，使得水环境中乙草胺浓度和检出率逐年增加[,,,,]；甚至在长期接触乙草胺的工人**中也有0.15μg/L的残留量检出[]。环境中大量残留的乙草胺可能会对水生生物的生长、发育、繁殖以及群落的稳定等造成不利影响。

　　试验用鱼为斑马鱼Daniorerio野生型品系(AB)(由浙江大学动物科学院提供)。将斑马鱼成鱼雌、雄分开饲养于斑马鱼养殖系统，早晚2次定时喂食刚孵化的新鲜丰年虫Artemianauplii。饲养水温控制在(26±1)℃，光周期为

　　14h/10h(光/暗)，自然死亡率保持在5%以下。饲养两周后挑选体型大小一致、健康活泼的个体供试。

　　93.2%的乙草胺(acetochlor)原药(由杭州庆丰农化有限公司提供)。TrizolreagentRNA提取试剂(Invitrogen公司,美国)；UNlQ-10柱式总RNA抽提试剂盒(上海生物工程有限公司)；PrimeScriptTMRTreagentKit反转录试剂盒、gDNAEraser去基因组DNA试剂盒和SYBRGreenPCRKit实时荧光定量PCR试剂盒(Takara公司，大连)。

　　斑马鱼养殖系统(北京爱生科技发展有限公司)；StepOnePlusTMReal-TimePCR仪(Appli**Biosystems公司，美国)；智能光照培养箱(宁波江南仪器厂)；台式离心机(Eppendorf公司，德国)；万分之一电子分析天平(Sartorius公司，德国)；TE2000尼康倒置荧光显微镜；岛津GCMS-2025plus气-质联用仪(岛津公司，**)等。

　　试验用水为经活性炭处理后的自来水，硬度86mg/L(以CaCO3计)，pH=6.8，导电率为380μs/cm。将乙草胺原药用水溶解、配制成200mg/L的母液，加入到各处理组中，使乙草胺终浓度分别为0.625、1.25、2.5、5.0和10.0mg/L，设不加药空白对照。每处理3个重复，每重复10L水、10条成鱼，连续暴露96h，试验周期内不更换药液。每24h观察、记录斑马鱼的中毒症状和死亡情况，计算各处理组96h的死亡率及半数致死浓度(LC50)[]。

　　于试验前24h将挑选出的雌、雄成鱼按1∶2(♀∶♂)配对放入产卵盒，待产完卵后30min将卵挑出，放入(26±1)℃胚胎标准用水(117.60mgCaCl2·2H2O，49.30mgMgSO4·7H2O，25.90mgNaHCO3以及2.30mgKCl溶解于1L去离子水)[]中清洗两次，以去除凝结的卵和粪便。将卵在清水中、26℃条件下培养至产后3h，在显微镜下挑出发育正常、已进入囊胚期的卵用于急性毒性试验。共设0.44、0.875、1.75、3.5、7.0和14.0mg/L6个浓度组和空白对照组，每组3个重复，每个重复30枚卵，试验周期内不更换药液。将空白对照组和试验组分别置于(26±1)℃培养箱中培养至受精后120h，光照周期同上。根据卵是否出现乳白色凝结、小鱼有无心率、**是否流动记录死亡数，并及时挑出死卵、卵壳及死亡幼鱼，以防止污染水质。

　　在预先装有500mL药液的1000mL烧杯中，放入200枚发育正常、受精3h后的受精卵，分别设置成鱼96h-LC50值的1/10和1/50两个暴露浓度组和一个空白对照组，每处理3个重复，每72h更换一次药液。从胚胎囊胚期(受精后3h)开始持续暴露至受精后10d和14d取样。每个重复随机选取斑马鱼幼鱼40条，用吸水纸吸干幼鱼表面的水,分别放入Trizolreagent试剂中，并于-20℃保存，用于总RNA的提取及甲状腺相关基因表达量的测定。染毒期间及时挑出死亡的卵或幼鱼，以防止污染水质，并记录死亡数。当幼鱼全部孵出并上浮后，每天喂食新鲜绿藻和蛋黄溶液，将畸形的小鱼置于荧光倒置显微镜下观察并拍照。

　　按照UNlQ-10柱式总RNA抽提试剂盒标注方法提取总RNA后，采用PrimeScriptRTreagentKit反转录试剂盒进行反转录，并用gDNAEraserKit试剂盒去掉基因组DNA。实时荧光定量PCR测定：按照SYBRGreenPCRKit荧光定量试剂盒说明书在冰上配制20μL反应体系；反应程序为95℃30s，95℃5s，57℃30s，72℃30s，共40个循环；溶解曲线为95℃15s，60℃1min，95℃15s；所用基因引物序列参考Yu等[]和Jin等[]的报道(见)。

　　于成鱼及胚胎急性毒性、胚胎慢性毒性暴露之前(0h)和成鱼急性毒性(96h)、胚胎急性毒性(120h)结束后，以及胚胎慢性毒性更换药液(72h)前，分别取200mL水样，于-20℃保存，用于监测试验过程中乙草胺的消解状况。所采用的GC-MS检测方法参照Tan等的报道[]。

　　采用SPSS17统计分析软件，以药剂质量浓度的对数值为自变量(x)，以斑马鱼在相应浓度下的死亡率几率值为因变量(y)，建立“剂量-效应”线性方程，计算LC50值、相关系数(r)和95％置信限。

　　实时荧光定量PCR测定采用2-ΔΔCt[]方法计算各基因mRNA的相对表达量，并通过T-test检验试验组和对照组的差异显著性(P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著)。

　　本研究监测了全部试验过程中乙草胺的质量浓度变化，结果见。表明：在胚胎慢性毒性(每72h更换药液)、成鱼急性毒性(96h)及胚胎急性毒性(120h)试验过程中，乙草胺的消解率分别为4.7%～6.3%、3.4%～5.6%和4.1%～6.1%，即各试验阶段中乙草胺在暴露水体中均相对稳定，且实际浓度接近于设定浓度值。

　　测得乙草胺对斑马鱼成鱼的96h-LC50值为3.04mg/L，线性方程为y=3.45x+3.19(r=0.98)，95%置信区间为2.41～4.36mg/L。乙草胺对斑马鱼胚胎的120h-LC50值为5.32mg/L，线性方程为y=2.92x+2.86(r=0.94)，95%置信区间为4.49～6.54mg/L。在整个试验周期内，对照组成鱼未见死亡，对照组幼鱼死亡率不超过5%，证明试验有效。

　　在乙草胺0.3mg/L(成鱼96h-LC50值的1/10)质量浓度下暴露5d后，观察到斑马鱼幼鱼出现明显的躯干弯曲、心包囊水肿等致畸效应()；而0.06mg/L(成鱼96h-LC50值的1/50)质量浓度处理组在试验周期内未观察到显著的致畸现象。

　　斑马鱼胚胎受精后3h起在0.06及0.3mg/L乙草胺下连续暴露14d，试验周期内，对照组死亡率最高为12%，处理组死亡率最高为20%，校正死亡率不超过10%。分别于10和14d时取整条幼鱼，检测了与下丘脑-垂体-甲状腺轴相关的11个基因crh、tsh、s1c5a5、甲状腺球蛋白(tg)、甲状腺过氧化物酶(tpo)、甲状腺激素转运蛋白(ttr)、trα、trβ、d1、d2和**苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(ugt1ab)的表达量变化情况，结果见。从中可知，暴露10d后，乙草胺对上述11个基因的表达均表现出了不同程度的抑制作用，且存在一定的浓度-效应关系。其中，低质量浓度(0.06mg/L)乙草胺处理组斑马鱼幼鱼体内d2、ttr基因的表达量显著下调，分别为对照组的0.60和0.68倍，其余基因未见明显变化；高浓度(0.3mg/L)乙草胺处理组中，斑马鱼幼鱼体内d1、ttr、d2、tra、crh和ugt1ab基因的表达量均显著下调，分别为对照组的0.14、0.16、0.47、0.74、0.49、0.19倍，tsh、tpo、tg和s1c5a5的表达量也有所下调，分别为对照组的0.57、0.70、0.53和0.64倍，但与对照差异不显著(P＞0.05)，trβ则未见明显变化。暴露14d后，低浓度组中tsh、s1c5a5、trβ和d2基因的表达量显著下调，分别为对照组的0.53、0.45、0.55和0.60倍，其余基因变化不明显；高浓度组中除d1的表达量显著上调，为对照组的1.38倍外，其余各基因表达量均无显著性变化。

　　急性毒性试验以致死效应反映乙草胺对斑马鱼的影响。Nagel等[]认为，胚胎比成鱼对有害化合物更敏感，更适合作为急性毒性试验的受试动物。但在本研究中，斑马鱼成鱼比胚胎对乙草胺更敏感，这与杨亚洲等[]的研究结果相似。在杨亚洲等的试验中，毒死蜱对稀有鮈鲫Gobiocyprisrarus胚胎和成鱼的96h-LC50值分别为7.59和0.0272mg/L，其成鱼比胚胎对毒死蜱更敏感，他们认为这可能与胚胎期卵膜的保护作用有关，卵膜阻止了外来大分子的穿透进入。乙草胺对斑马鱼胚胎和幼鱼的致畸效应(包括游囊关闭、心包囊水肿、卵黄囊水肿、色素沉积、脊索弯曲、尾椎弯曲等)是评价其慢性毒性的重要指标，本研究中观察到斑马鱼幼鱼出现了明显的脊索弯曲和心包囊水肿，这与此前乙草胺可造成非洲爪蟾Xenopuslaevis胚胎腹部水肿、面部畸形、脊柱弯曲及尾巴弯曲等多种畸形[]的报道相一致。Hermsen等[]认为，心包囊水肿与视黄酸代谢有关，其代谢异常往往会引起颅面畸形、鳃弓畸形及心包囊水肿等。脊索则是斑马鱼的重要运动器官，脊索弯曲极大地限制了斑马鱼的运动能力，进而会影响到斑马鱼躲避天敌和取食，降低其对环境的适应能力和生存能力[]。

　　根据常菊花等[]的研究，受精后10～21d是斑马鱼从仔鱼向幼鱼转变的发育敏感窗口期，甲状腺激素在此阶段发挥着重要作用，并且T3的含量在10d时达到最高值，间接代表脱碘酶活力的T3/T4比值在14d时达到最高值，此阶段进行有毒物质暴露对于评价该物质对斑马鱼幼鱼甲状腺内分泌的干扰效应具有重要意义。据此，本研究取受精后3h的斑马鱼进行乙草胺暴露处理，于10和14d时取样检测，以评价乙草胺对斑马鱼早期发育阶段幼鱼体内相关基因表达的影响，深入了解该药物对生物体内分泌的干扰作用。

　　在受精后3h～10d窗口期暴露试验中，0.3和0.06mg/L的乙草胺对除tpo、trβ以外的其他甲状腺相关基因的表达均具有不同程度的抑制作用，且0.3mg/L暴露组的抑制效果更为显著，这与Li等[]关于乙草胺暴露使稀有鮈鲫幼鱼和雌性成鱼脑部d1、d2、nis等基因的表达量显著下调的报道一致。这些甲状腺相关基因的表达受到抑制可能会减弱甲状腺激素的合成和分泌，从而抑制幼鱼的发育。例如：crh和tsh表达量下调可能会减弱下丘脑和垂体对甲状腺组织的**作用，使甲状腺激素的合成及分泌减少；而s1c5a5和tg表达量下调可能会抑制甲状腺中碘的恢复和摄取，从而影响T4的合成；d2是催化T4脱碘生成高活性T3的关键性酶。有研究表明，敲除d2基因后，斑马鱼幼鱼发育将严重滞后[]，d1在促进T3生成过程中发挥着重要作用[]，d1和d2表达量同时下调，则可能会使T3的合成受到严重抑制。甲状腺激素主要通过与Ttr蛋白结合而被转运到靶标部位，Yu等[]发现，ttr表达量下调的同时，甲状腺激素浓度也相应降低。本研究中tra和ugt1ab基因表达量的下调，可能是因为甲状腺激素合成受到抑制从而使得其与受体的结合和清除作用减弱所致。

　　在受精后3h~14d窗口期暴露试验中，0.06mg/L的乙草胺对tsh、s1c5a5、trβ和d2等基因的表达均有抑制作用，这可能会减少甲状腺滤泡细胞对碘的摄取，抑制T4向T3的转化以及T3和受体的结合；而0.3mg/L暴露组对这部分基因的表达却没有显著影响。此前Helbing等[]及Li等[]的研究发现，低浓度的乙草胺暴露可使牛蛙、稀有鮈鲫胚胎的trα基因表达量显著上升，高浓度乙草胺暴露则使trα基因表达量显著下降。由此推测，甲状腺相关基因的表达可能与乙草胺的暴露浓度相关，同时也可能是由于随着暴露时间的延长和鱼体的进一步发育，斑马鱼体内的自我调控机制发挥了一定的作用，从而改变了药物对机体的初始影响。

　　综上所述,乙草胺对斑马鱼的急性毒性为中等毒,且成鱼比胚胎更为敏感;0.3mg/L乙草胺暴露可引起幼鱼心包囊水肿和尾椎弯曲等致畸现象。受精后3h的斑马鱼脴胎分别于0.3和0.06mg/L乙草胺中暴露10d和14d,均能不同程度地抑制斑马鱼甲状腺相关基因的表达,对斑马鱼幼鱼可能具有一定的甲状腺内分泌干扰作用。