甘油菌菌种活化流程，甘油菌怎么保存

回答1、LB培养基制取：提前准备20g胰蛋白胨，5G酵母提取物，20g氧化钠，添加800Ml双蒸水，翻拌，直到彻底融解，随后用0.2ml氢氧化钠溶液（5mol/L）将ph调整到7.4，并添加1L双蒸水，髙压蒸气杀菌。2、倒平板：培养液置放在60℃恒温水浴锅中隔热保温，取下后，轻轻地旋转培养液，让琼脂粉遍布匀称。

一、甘油菌菌种活化流程

1、LB培养基制取

（1）提前准备20g胰蛋白胨，5G酵母提取物，20g氧化钠，随后添加800Ml双蒸水，搅拌均匀，直到彻底融解，然后应用0.2ml的氢氧化钠溶液（5mol/L）将ph调整到7.4上下，并添加1L的双蒸水，髙压蒸气杀菌二十分钟上下。

（2）在高压灭菌以前，理应添加15g/L（铺制平板电脑用）或9g/L（配置高层琼脂糖用）的琼脂糖。

2、倒平板

（1）超净工作台、接种环、细胞培养皿，酒精喷灯等用紫外线灭菌三十分钟上下。

（2）高压灭菌后的培养液置放在60℃的恒温水浴锅中隔热保温，直到水溶液并未制冷的情况下，将培养液取下，轻轻地旋转，让琼脂粉分布均匀在培养液水溶液中。

（3）直到制冷至50℃的情况下，在超净工作台中添加抗菌素，并转动将培养液混和匀称，随后从蒸发皿中倾出培养液铺制平板电脑。

（4）将甘油菌冻存管放到冰面，立即用接种环在冻存管内的冰渣上蘸一下，随后涂上平板电脑。

3、很多塑造

（1）将冷冻的液体培养液再次高溫高压灭菌，直到制冷至50℃的情况下，添加抗菌素，然后将菌体挑至早已添加抗菌素的液体培养液中（2-5ml），37℃，200rpm塑造8钟头上下。

（2）依照1：500-1000的占比，将加上了抗菌素的液体LB培养基稀释液上一流程个人所得菌液（20-25μL菌液25ml液体LB培养基），37℃，200rpm塑造12-16钟头。

二、甘油菌怎么保存

1、如果是20%凡士林储存菌苗（凡士林：菌液=20：80），一般置放在零下70℃的自然环境下储藏。

2、如果是一般细菌的菌种，在提纯后，打疫苗在一般骨头汤管内，随后历经4-6钟头增菌后，放进适当凡士林-盐水储存液，在零下20℃的自然环境下开展储藏。如果是链球菌属和奈瑟氏菌属的菌苗，在提纯后，打疫苗在血清蛋白骨头汤管内，在5-10%CO2中历经8-10钟头增菌后，添加适量凡士林-盐水储存液，置放在零下80℃的自然环境下开展储藏。如果是细菌菌苗，在提纯后，立即取菌洗入骨头汤，添加凡士林-盐水储存液，置放在零下20℃的自然环境下开展储藏。