菌种保存的方法有哪些，菌种传代操作规程

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　　菌种保存方法包括斜低温保存法、液体石蜡覆盖保存法、砂保存法、滤纸保存法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜低温保存方法：将菌种接种到合适的固体斜培养基上，用油纸包裹棉塞，然后转移到2-8℃保存在冰箱里。

　　2、液体石蜡覆盖保存方法：用液体石蜡覆盖斜菌，使其与空气隔离。

　　(1)将菌种接种到合适的固体斜面培养基上。菌种完全生长后，用油纸包扎棉塞，然后转移到2-8℃保存在冰箱里。

　　(2)如果是霉菌、放线菌和芽孢菌，一般可以保存2-4个月左右，需要移植一次。如果是酵母，一般可以保存2个月左右，需要每月移植一次。

　　(1)将液体石蜡放入三角形烧瓶中，用棉塞塞住，用牛皮纸包扎，然后在0.1MPa，121.3℃灭菌约30分钟，然后放置40分钟℃蒸发水蒸气进入温箱。

　　(2)用合适的斜面培养基培养需要保存的菌种，获得强大的孢子或菌体。

　　(3)用灭菌吸管吸出液体石蜡，注入斜面，用量高于斜面顶部1cm左右为宜。

　　(4)将试管直立，保存在低温或室温下。

　　(5)霉菌、放线菌、芽孢菌可保存2年以上，酵母可保存1-2年，一般无芽孢菌可保存1年，脑膜炎球菌可保存3个月左右(37)℃环境下）。

　　(1)准备好河沙，加入10%稀盐酸，然后加热煮沸约30分钟，去除里面的有机质，然后倒出酸水，冲洗至ph中性，然后干燥，过筛(40目筛)，去除粗粒。

　　(2)准备无腐植质的非耕作层瘦黄土或红土，浸泡洗涤几次，直至ph中性，然后干燥，碾碎，过筛(100目筛)，去除粗颗粒。

　　(3)按2：1的比例将沙子和土壤混合，放入试管或安瓿管中，塞，1212℃灭菌约30分钟。

　　(4)在斜培养基中培养菌种，获得强壮的菌体，然后将3-5注入斜培养物中ml用无菌水清洗细胞或孢子制成菌悬液。

　　(5)用灭菌吸管吸收菌悬液，然后均匀滴入沙管(0.2-0.5ml/管)。

　　如果是放线菌或霉菌，可以直接将孢子挑入沙管中。

　　(7)用火焰将沙管熔封，然后储存在低温(4-6℃)保存在干燥的地方，或者用牛皮纸或塑料纸包裹沙子，放在干燥器里。

　　保存期间，每6个月左右检查一次菌种存活性。

　　(1)准备滤纸条(0)。

　　5×1.2cm），安瓿管（0.6×8cm），然后每根安瓿管放1-2个滤纸条，塞上棉塞，0.1MPa，121℃灭菌约30分钟。

　　(2)在适当的斜面培养基上培养菌种，获得强壮的菌体。

　　(3)在灭菌培养皿中滴加1-2ml灭菌脱脂牛**，取环菌苔，在牛**中混合均匀，制成浓悬液，然后用镊子从安瓿管中取出滤纸条，浸泡在细菌悬液中，吸收，放回安瓿管，塞上棉塞。

　　(4)将安瓿管放入干燥器中(含有五氧化二磷作为吸水剂)，用真空泵抽气至干燥。

　　(5)将棉花塞入管内，用火焰熔封，然后保存在低温环境中。

　　(1)准备80%甘油，然后进行高压蒸汽灭菌。

　　(2)在合适的斜面培养基上培养菌种，用无菌水注入，制成高浓度的菌悬液。

　　（3）取出1ml甘油和菌液混合均匀，使甘油浓度约为10-30%，然后放置在零下70%℃保存在环境中。

　　细胞在低温下迅速冻结，然后在真空条件下干燥，停止微生物的生长和酶活性。同时，为了保证细胞在冷冻和水升华过程中不受损伤，应使用保护剂制备细胞悬浮液（细菌在冷冻和脱水过程中起保护作用的溶质），通过氢键和离子键对水和细胞的亲和力稳定细胞成分的形状。

　　点燃酒精灯，在火焰旁上方燃烧接种环。

　　用左手拇指、食指和中指夹住原有的菌种斜面培养基(菌种管)和待接种的新斜面培养基(接种管)。菌种管在前，接种管在后，然后斜持试管(45°），让试管内斜向上，两个试管的开口平整。

　　3、右手在火焰旁边转动两根管子的棉塞，然后右手拿着接种环的柄端，在火焰上垂直燃烧接种环。

　　顶部的环必须是红色的，接种时进入试管的部分应通过火焰燃烧。

　　用右手的小指和手掌，以及无名指和小指，拔出两根管子的棉塞，拿住，然后在火焰上通过试管。

　　将接种环插入菌种管中，接触无菌**生长的培养基。冷却后，从斜面上挑选一点**，然后迅速插入接种管，轻轻地在斜面上划线（从下到上划线，然后从下到上划线）。

　　6、接种后，将管口通过火焰灭菌，塞上棉塞。