微生物接种方法

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　　微生物接种方法主要有平板接种、斜接种、倾注培养、穿刺接种、液体接种五种。例如，液体接种方法是指将微生物直接种植在液体培养基中，然后不断振荡或搅拌，使微生物在液体培养基中均匀生长繁殖的培养方法。

　　该方法旨在快速获得大量的繁殖体，适用于培养有氧微生物和植物组织。

好文探索：【微生物】八种接种方法，九个注意事项

　　在实验室中，将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上，或活的生物体内的过程叫做接种。

　　常用的微生物实验室接种方法有以下几种：。

　　1）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。

　　2）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针，用的培养基一般是半固体培养基。

　　它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

　　3）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。

　　所用的活体可以是整个动物。也可以是某个离体活组织，例如猴肾等。也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

　　4）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

　　5）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。

　　常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。

　　6）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。

　　7）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。

　　此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

　　8）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些**。在实验室，用得最多的接种工具是接种环、接种针。

　　由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。

　　在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。

　　接种细菌时必须穿工作服、工作帽。

　　进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间工作前经紫外线消毒后使用。

　　接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。

　　进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95％酒精点燃烧灼三次后使用。

　　从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。

　　接种样品，转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。

　　接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。

　　吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

　　处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

精选问答：

　　1、怎么样大量繁殖微生物？

　　要大量繁殖微生物，可以采取以下几种方法：

　　1. 培养基准备：选择适合目标微生物生长的培养基，并按照配方准备培养基。培养基可以包含有机物、无机盐、水和其他必需的营养物质。

　　2. 培养条件控制：为了促进微生物的繁殖，需要提供适宜的环境条件，如温度、pH值和氧气浓度等。根据目标微生物的特性，调整这些条件以最大程度地促进其生长和繁殖。

　　3. 接种：将目标微生物接种到培养基中。可以使用已有的培养物进行接种，或者从自然环境中采集微生物样品进行接种。

　　4. 培养器具选择：选择适合的培养器具，如培养皿、培养瓶或发酵罐等，以提供适当的生长空间和条件。

　　5. 培养过程控制：在培养过程中，需要定期检查和调整培养条件，如温度、pH值和营养物质的补充等。同时，避免污染和杂菌的进入，以保持纯净的培养物。

　　6. 放大培养规模：一旦微生物开始繁殖，可以逐渐扩大培养规模，增加培养容器的数量或容积，以获得更多的微生物产物。

　　需要注意的是，不同的微生物可能对培养条件有不同的要求，因此在进行大量繁殖之前，最好先了解目标微生物的特性和最适宜的培养条件。 在进行微生物培养时，要遵守相关的实验室安全规范，以确保操作的安全性和有效性。

　　2、简述动物接种培养的过程？

　　一、准备工作

　　准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。

　　二、取材

　　在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

　　理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，**组织比正常组织容易培养。

　　取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。

　　三、培养

　　将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

　　正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不**，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的**生长期。

　　细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

　　四、冻存及复苏

　　为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。

　　在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

　　扩展资料：

　　进入细胞间开始细胞培养时，注意事项：

　　①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。

　　②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

　　③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。

　　④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

　　⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。

　　⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。

　　⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。