红薯除草专用除草剂的配方
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不能用。因为苯嘧磺草胺是一种杀草剂,对于薯类作物有毒性影响,会影响薯类作物的收成和质量,同时也会对土壤造成污染。所以在红薯田中不能使用苯嘧磺草胺。如果需要除草,可以采用物理方法和生物方法,如手工除草、覆盖草膜、利用天敌等方法。这些方法都对环境和作物的危害相对较小。
2、氟磺胺草醚对红薯苗后地除草效果?氟磺胺草醚对红薯苗后地除草没有效果,不能用
氟磺胺草醚可在大豆、花生田中防除苘麻、铁苋菜、三叶鬼针草、油菜裂叶牵牛等阔叶杂草,但不可用在玉米以及高粱上,这些作物对氟磺胺草醚敏感。氟磺胺草醚属于一种选择性触杀型除草剂,杂草的根茎叶在吸收药液后,叶片会黄化,接着迅速枯萎死亡,常在大豆出苗前后使用。
3、二甲四氯能不能用在红薯田?二甲四氯又称作四氯化二甲酯,是一种常用的杀虫剂和除草剂。据我所知,二甲四氯并不适用于红薯田。
红薯对化学药剂的敏感性比较高,尤其是在生长期间,会吸收土壤中的养分,同时也容易吸收到化学药剂。在红薯田施用化学药剂可能会对红薯的生长和品质产生不良影响。
使用农药是需要严格遵守农药管理条例和规定的。根据中国**的相关法律法规,有些化学药剂在红薯田是禁止使用的,如含有六六六等有毒物质的农药等。
4、种红薯地里用什么药?1、芸薹素内酯

芸薹素内酯是一种很好的植物生长调节剂,在红薯上的最佳使用时期一般在红薯分枝期,在分枝期使用0.2毫升/升的芸薹素内酯对植株叶面进行均匀喷雾,喷过一周左右,你会发现植株茎蔓明显变得粗壮,生长旺盛,喷施1-2次增产效果明显,这些有很多农户都会使用。
2、矮壮素
今年进入7月份前后,很多地方雨水偏多,红薯植株生长旺盛,为了避免只长秧不结红薯,这时就要对植株进行控旺,矮壮素是常用的一种。
5、打了除草剂三天以后可以栽红薯吗?不建议在打了除草剂三天以后立即栽种红薯,因为除草剂在土壤中停留的时间会因环境因素、草药种类等因素而有所不同。如果在除草剂还没有完全分解的情况下在土壤中种植红薯,可能会对红薯的生长产生不利影响,抑制红薯的生长发育,影响产量和品质。
不同的除草剂对不同的植物有不同的影响,有些除草剂会对红薯的生长产生直接的负面影响。而且除草剂在土壤中的降解速度、残留量也会对红薯生长产生影响。
为了保证红薯的生长和产量,应该等待除草剂充分分解后再进行栽种。具体时间会根据环境因素、草药种类、浓度等多种因素而有所不同。建议在等待7-10天后再进行栽种,以确保除草剂在土壤中充分降解,最大限度地减少对红薯的负面影响。
延伸内容:应该遵循科学合理的作物轮作,避免长期连作同一地块,以减少土壤中病虫害的积累和因缺乏特定养分而导致的土壤退化现象。同时,在进行农业生产中,应该注意平衡化、可持续化的原则,充分发挥农业生产对环境保护和可持续发展的促进作用。

拓展好文:一种优化的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法
专利名称:一种优化的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法
技术领域:
本发明涉及植物转基因技术领域,具体地是一种优化的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法。
背景技术:
将人工分离或修饰过的基因导入到生物体基因组上,由于外源基因的表达使生物体的性状发生可遗传的改变,这一技术称之为转基因技术。转基因技术的发展打破了物种隔离,能够将具有优良性状的目的基因导入到植物基因组中,从而使得许多植物的遗传性状得到改良。在转基因的操作过程中,只有少数外源的DNA能够转入到植物细胞内,进一步整合到植物基因组DNA上,还有大多数的植物细胞是没有被外源DNA转染,如何剔除这些未转基因的植物细胞是转基因技术的核心问题之一。目前一般利用选择标记基因辅助目的转基因的筛选。在目的基因转化时引入选择标记基因,赋予受体植物特定的筛选标记,以便于在数目庞大的植物转化后代中简便快速地筛选得到转基因阳性植株。抗生素是现在广泛使用的一种选择标记。大多数抗生素抗性基因作为植物筛选的标记基因,最常使用的有新霉素磷酸转移酶基因(NptII)和潮霉素磷酸转移酶(HPT)基因, 前者基因编码的酶使其转基因植物具有卡那霉素和新霉素抗性,而后者基因编码的酶则赋予转化受体潮霉素抗性。虽然抗生素抗性基因作为筛选标记基因有筛选方便和转化效率高等优点,但是这些抗性抗生素抗性如果转移到微生物特别是病原菌里,将使病原菌产生抗生素抗性,对人类的健康产生安全隐患。另一方面,抗生素的价格昂贵,作为大规模的转基因作物产业化生产来说成本太高。这两方面的因素决定了抗生素抗性基因在转基因产业化筛选方面的应用受到限制。除草剂是近几年发展起来的一种筛选标记,最常用的除草剂是草甘膦和草丁膦。抗除草剂基因不仅作为筛选标记基因还是一种目的基因,利用除草剂作为筛选剂使转基因作物在具有目标性状的同时还能具有除草剂抗性。另一方面,除草剂的价格便宜,可以大大降低转基因作物产业化的成本。但是除草剂作为一种新兴的筛选标记, 其操作体系尚不成熟。大田使用除草剂一般用喷洒的方式来杀死杂草,这是一种高选择压的使用方式,对于TO代转基因阳性苗的筛选显然不合适。因为过高的选择压可能杀死一些转基因阳性苗。另一方面,目前许多农作物转化用的活体转基因技术,TO代为嵌合体,喷洒**杀死绝大多数的TO代植株,导致转基因的失败。 摸索一套切实可行的筛选方法对于除草剂选择标记的推广使用具有比较重要的实际应用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种优化的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法,包括以下步骤

(a)在TO代转基因农作物的新生的第3飞叶片上,用marker笔标记直径约Icm的圆圈。(b)用移液器吸取2ul的除草剂溶液点在圆圈的中心。
(c)5 7天后,经除草剂处理的有一片或以上叶片表现正常的植株为转基因阳性植株。 (d)将上述筛选得到的转基因阳性植株移栽到大棚里,收种。本发明中TO代转基因农作物是指用植物活体为受体,将携带除草剂基因或者携带除草剂选择标记基因的表达载体转化农作物得到的TO代转基因植株。以植物活体为外植体转化得到的TO代转基因植株为嵌合体,常规的除草剂喷洒筛选方**把嵌合体杀死, 发明人大量的实验结果证明本发明提供的涂抹筛选方法能够高效、简便地筛选得到TO代转基因阳性植株。在除草剂筛选过程中,为了使除草剂溶液均勻附着在作物叶片的表面,本发明人在除草剂溶液中添加了表面活性剂,通过实验证明在除草剂制剂按照比例稀释在0. 02%的 silwet-L77水溶液中筛选效果最好。本发明中所述的除草剂是任一可以作为植物筛选标记的除草剂,优选为草甘膦和草丁膦。本发明中所述的作物为大豆、小麦、玉米、水稻或高粱的野生或栽培品种、品系、育种材料或中间材料。为了便于理解,下面将结合附图和实施例进一步诠释本发明。具体实例和附图仅是为了更好的阐述本发明,并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变,这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
图1为TO代转基因大豆草胺磷涂抹实验筛选结果示图,其中A图为野生型,B图为转基因阳性植株。红色圆圈为草胺磷涂抹的叶片部位。图2为TO代转基因大豆的PCR检测结果,其中泳道M为marker,+是以质粒为模板的正对照,-为野生型负对照,1 5为检测的5个转基因株系。图3为TO代转基因棉花草胺磷涂抹实验筛选结果示图,其中A图为野生型,B图为转基因阳性植株。图4为TO代转基因棉花的PCR检测结果,其中泳道M为marker,+是以质粒为模板的正对照,-为野生型负对照,1 9为检测的9个转基因株系。
具体实施例方式下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法,具体步骤可参见 《Molecular Cloning: A Laboratory Manual》 (Sambrook, J. , Russell, David W., Molecular Cloning: A Laboratory Manual,3rd **ition,2026, NY, Cold Spring Harbor)。所用引物及DNA序列均由上海英骏生物技术有限公司合成。实施例一、涂抹法筛选转基因大豆 1.实验材料
质粒含有bar基因,带有潮霉素筛选标记基因的pCAMBIA1300-bar载体,具有抗草铵磷除草剂。PCR扩增bar基因连接到pCAMBIA1300 (购自Invitrogen公司)载体上得到 pCAMBIA1300-bar 载体。
农杆菌菌株AGLO。供转化的大豆品种黑农37号,华疆4号。农杆菌的培养
挑取甘油冻存的含有目的基因的农杆菌,于YEB平板上画线,观で黑暗培养箱培养2 天。挑取单菌落接种于40ml抗性YEB液体培养基中,观で黑暗摇床200rpm摇**,至 0D600 1。吸取上述培养物250 300 ill涂布于平板直径为15cm的YEB固体培养基上, 观で黑暗培养箱培养2天后,此备用的新鮮平板当天使用,约20°C室温黑暗待用,不要继续 存留于观で黑暗培养箱或转存于4°C冰箱。渗透培养基的制备

首先按照下述配方配制AA培养基。培养基配制(IL)
MgS040.g
KCl2.95g
NaH2P04*2H20 0. 15g 肌醇0. Ig
谷氨酸0.876g
天门冬氨酸 0. 266g 精氨酸0. 174g
酪蛋白水解物 0. 3g 蔗糖20g

铁盐溶液5ml ① **TA-2Na 7. 46g/L 调 pH=8. 0
②再加4. 5ml/L 5M NaCl
③FeS04*7H20 5.56g/L
CaCl2 溶液4. 5ml25.06g/L
VBl 溶液IOmllg/L
VB6 溶液Imllg/L
畑酸溶液Iml0. lg/L

B5 微量ImlMnS04*H20 7. 58g/L
ZnS04.7H20 2. Og/L H3B033. Og/L
KI0.75g/L
Na2Mo04*2H20 0. 25g/L CuS04*5H20 0.025g/L CoC12.6H20 0.025g/L
在IL AA培养基中添加下列成分
As (100 200 ii M ); KT (0. 2mg); 2,4_D (Img)5DTT (ImM ); L-Cysteine (200 400mg) ;silwet-L77 (100 400 ぬ)。
将培养好的农杆菌用上述滲透培养基悬浮,使悬浮菌液的0D600值为0. 4 0. 7,pH至 5. 0 5. 5,转化渗透培养液制备完毕。

大豆的转化实验
利用上述制备好的渗透培养基侵染大豆幼苗,然后移栽到大棚进行培养。代转基因阳性苗的筛选以及获得
上述转化大豆得到的TO代转基因植株为嵌合体,植株的部分器官含有目的表达,具有目标表型。因载体含有目的基因bar,如果转基因成功,bar插入大豆基因组,使转基因阳性植株的部分器官具有草铵磷抗性。所以,我们通过草胺磷检测实施例一中的转基因大豆的叶片来筛选TO代阳性转基因植株。大豆的叶片为三生复叶,选取复叶的中间小叶片, 用Mark笔标记一个圆圈,用移液器滴加2μ1草铵磷溶液(Basta 100mg/L + silwet-L77 200yl/L)在圆圈中间,5-6天后不具抗性的植株表现萎蔫、枯黄等明显的药害反应。用上述方法涂抹大豆的第一片直到第五片复叶。五片复叶均表现草铵磷药害反应的,认定为转基因阴性植株,有一片及以上叶片表现草胺磷抗性的,认定为转基因阳性植株(图1)。我们利用涂抹法筛选得到220株TO代阳性植株代转基因苗的PCR检测
对TO代草胺磷筛选的抗性植株,进行PCR检测实验进一步验证转基因是否成功。转基因阳性植株因成功转化bar基因而表现草胺磷抗性。根据bar基因的序列,设计PCR扩增引物,进一步验证转基因株系的阳性。每株取一片新展开的叶片,CTAB法提取植物基因组 DNA。取IOpg的基因组DNA进行PCR反应。根据bar基因的序列,PCR扩增引物序列如下 引物 1 (上游)5' TCATCAGATTTCGGTGACGG 3' 引物 2 (下游)5' TCAACTTCCGTACCGAGCCG 3'
分别利用引物1和引物2,以抗性植株基因组DNA模板,扩增bar基因片段。扩增体系和程序为
IOX Buffer 2ul ;
IOmM dNTP 0.5ul ;

IOuM 引物 1 0. 5ul;
IOuM 引物 2 0. 5ul;
genomic DNA IOpg ;
Taq DNA Polymerase(5U/ul) 0.4ul ; ddH20 补足20ul。反应条件为 预变性95°C, 5min ; 变性 94°C, 20sec ; 退火 55°C, 30sec ; 延伸 72°C, Imin ; 30个循环;
再延伸72°C,IOmin0反应结束后,对PCR产物进行1. 5%琼脂糖凝胶电泳检测,可以检测到450bp的目的片段(结果见图2)。我们对5个株系进行了 PCR实验,结果全部呈阳性。这进一步证明了我们获得的抗性植株为转基因阳性株系。实施例二、涂抹法筛选转基因棉花1. 棉花的转化实验
按照实施例一中广3所示的方法制备含有pCAMBIA1300-bar的渗透培养基, 转化棉花,然后移栽到大棚进行培养。
棉花TO代转基因阳性苗的筛选以及获得

上述转化棉花得到的TO 代转基因植株为嵌合体,植株的部分器官含有目的表达,具有目标表型。因载体含有目的基因bar,如果转基因成功,bar插入棉花基因组,使转基因阳性植株的部分器官具有草铵磷抗性。所以,我们通过草胺磷检测实施例一中的转基因棉花的叶片来筛选TO代阳性转基因植株。选取已转化的棉花的新生叶片,用Mark笔标记一个圆圈,用移液器滴加2μ1草铵磷溶液(Basta 100mg/L + silwet-L77 200yl/L)在圆圈中间,5-6天后不具抗性的植株表现萎蔫、枯黄等明显的药害反应。用上述方法涂抹棉花的第 3片直到第5片新叶。2片新叶均表现草铵磷药害反应的,认定为转基因阴性植株,有一片及以上叶片表现草胺磷抗性的,认定为转基因阳性植株(图3)。我们利用涂抹法筛选得到 120株TO代阳性植株。代转基因棉花的PCR检测
对TO代草胺磷筛选的抗性植株,进行PCR检测实验进一步验证转基因是否成功。 转基因阳性植株因成功转化bar基因而表现草胺磷抗性。每株取一片新展开的叶片,CTAB 法提取植物基因组DNA。取IOpg的基因组DNA按照实施例一中步骤6所述的方法进行PCR 反应。我们对9个株系进行了 PCR实验,结果全部呈阳性(图4)。
权利要求
1.一种优化的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法,包括以下步骤(a)在TO代转基因农作物的新生的第3飞叶片上,用marker笔标记直径约Icm的圆圈;(b)用移液器吸取2ul的除草剂溶液点在圆圈的中心;(c)5^7天后,经除草剂处理的有一片或以上叶片表现正常的植株为转基因阳性植株;(d)将上述筛选得到的转基因阳性植株移栽到大棚里,收种。
2.根据权利要求1所述的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法,其特征在于所述TO代转基因农作物是指以植物活体为受体,将携带除草剂基因或者携带除草剂选择标记基因的表达载体转化农作物得到的TO代转基因植株。
3.根据权利要求1所述的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法,其特征在于所述除草剂溶液是除草剂制剂按照比例稀释在0. 02%的silwet-L77水溶液中。
4.根据权利要求广3所述的任一权利要求,其特征在于所述的除草剂为可用于转基因植物筛选的除草剂,优选为草甘膦和草丁膦。

5.根据权利要求广3所述的任一权利要求,其特征在于所述的农作物为大豆、棉花、小麦、玉米、水稻或高粱的野生或栽培品种、品系、育种材料或中间材料。
全文摘要
本发明提供了一种优化的涂抹除草剂筛选转基因作物的方法,包括(a)在T0代转基因农作物的新生的第3~5叶片上,用marker笔标记直径约1cm的圆圈;(b)用移液器吸取2ul的除草剂溶液点在圆圈的中心;(c)5~7天后,经除草剂处理的有一片或以上叶片表现正常的植株为转基因阳性植株;(d)将上述筛选得到的转基因阳性植株移栽到大棚里,收种。本发明提供的涂抹筛选方法能够高效、简便地筛选得到T0代转基因阳性植株,对于转基因作物的筛选具有重要的意义。
文档编号A01H1/04GK8SQ195
公开日2026年1月11日 申请日期2026年4月22日 优先权日2026年5月20日
发明者何峰, 夏勉, 张斌, 王伟娜 申请人:北京未名凯拓作物设计中心有限公司




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