硫酸铵盐析法沉淀蛋白质

1、盐析作用的原理：蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

2、盐析法的原理是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

3、盐析的原理是溶液中物质的溶解度和溶液中离子的平衡。盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。

4、盐析的原理是破坏了蛋白质在水中稳定存在的二个因素，从而使蛋白质发生沉淀。盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。

5、盐析法沉淀蛋白质的原理是：降低蛋白质的电常数，调节蛋白质溶液的等电点，与蛋白结合形成不溶性盐，使蛋白质溶液呈电中性，破坏了水化膜，从而会使得蛋白质凝聚，最终从溶液中析出。

相关的原理可以在庄荣辉学习网站中找到，与盐溶刚好相反，在蛋白质溶液中加入硫酸铵，会使得蛋白质的溶解度下降，因而沉淀出来。

这相当于是蛋白质胶体发生盐析，从而可以分离出来。蛋白质分离主要根据五种原理：分子大小、溶解度、电荷、吸附性质、对配体分子的生物学亲和力等。

在硫酸铵分级沉淀蛋白质的注意事项有沉淀反应至少应在50mm/L缓冲液中进行，是为了平衡硫酸铵溶解时产生的轻微酸化作用。硫酸铵是一种无机物，化学式为(NH4)2SO4，无色结晶或白色颗粒，无气味。280℃以上分解。

在提取土豆多酚氧化酶时，硫酸铵有助于沉淀非极性蛋白，从而使得目标酶得以分离和纯化。硫酸铵还可以保护目标酶不与杂蛋白结合，进一步纯化目标酶。

有吸湿性，吸湿后固结成块。加热到513℃以上完全分解成氨气、氮气、二氧化硫及水。与碱类作用则放出氨气。与氯化钡溶液反应生成硫酸钡沉淀。也可以使蛋白质发生盐析。

铵盐沉淀蛋白质（酶物质）是需要分级沉淀的，这里说的是指先将上清液用40%硫酸铵沉淀，逐步过渡到80%的硫酸铵溶液沉淀。

1、沉淀形成：随着硫酸铵试剂的加入，溶液中的目标物质与硫酸铵反应生成沉淀。沉淀的形成速度和形态取决于目标物质的性质和实验条件。过滤沉淀：当沉淀形成后，使用漏斗和过滤纸将溶液中的沉淀分离出来。

2、根据查询相关**息显示，当硫酸铵的浓度较高时，它可以与其他化合物形成复合物，从而干扰分级沉淀的过程，并且在过程中形成的固体颗粒较小且难以沉淀或过滤。

3、硫酸铵分级：不同的蛋白质可用不同浓度的硫酸铵沉淀，由此将不同的蛋白质分开的方法。用于蛋白质分离纯化的盐析技术。硫酸铵：无色结晶或白色颗粒。无气味。280℃以上分解。水中溶解度：0℃时70.6g，100℃时108g。

4、饱和硫酸铵则可沉淀包括**清蛋白在内的全部蛋白质。分段盐析的条件先需要进行小实验探索，如：先进行0%-30的硫酸铵沉淀，再进行30%-60%的硫酸铵沉淀，最后进行60%-80%的硫酸铵沉淀。

5、用高速离心机进行离心，淀粉酶沉淀在容器底部，倒掉上层的清液，生在容器底部的酶就是比较纯的淀粉酶了。不过用硫酸铵分级后得到的淀粉酶，内部含有硫酸铵，用定氮法无法准确测量酶的含量。可以用钼酸铵法来进行测量。

1、蛋白质中加入饱和硫酸铵或氯化钠溶液有沉淀析出，这是因为，蛋白质在饱和硫酸铵或氯化钠溶液溶解度减小而析出(没有新物质生成)，这个过程是可逆的，叫做盐析。是一个物理变化。

2、蛋白质的盐析反应，加饱和硫酸铵，生成沉淀，静置，然后倒出少量混浊沉淀，加水，沉淀溶解。原因：硫酸铵使蛋白质发生盐析，是可逆沉淀，加水后可以溶解。

3、降低蛋白质的溶解度。硫酸铵能够使蛋白质发生盐析，降低蛋白质的溶解度，使其以沉淀形式析出，该过程发生了物理变化，所得沉淀和原蛋白质的性质相同，所以加入足量的蒸馏水，沉淀又会溶解。

4、如饱和硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等，能使蛋白质脱去水化层而**沉淀，此过程称为盐析，其中并没有发生旧键的断裂和新键的形成，因此不是化学变化。盐析一般不引起蛋白质变性，当除去盐后，蛋白质又可溶解。

使蛋白质沉淀的方法有3种。盐析法在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

盐析法：多用于各种蛋白质和酶的分离纯化，不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。等电点沉淀法：不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。

蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂与某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。