微生物菌种保藏方法

微生物菌种保藏方法

微生物菌种保藏是维护微生物资源的重要手段之一，也是保护科学研究成果的必要措施。本文将介绍几种常见的微生物菌种保藏方法。

低温保存法

低温保存法是目前应用最为广泛的微生物菌种保藏方法之一。它的原理是将微生物菌株保存在低于0℃的温度下，通过降低菌株代谢率，达到长期保存的目的。常用的低温保存温度有-80℃和液氮保存法。

在低温保存中，需要注意以下几点：

• 要选择合适的保藏液，如甘油、DMSO等，以防止细胞被冰晶破坏。
• 保存过程中要避免温度波动，以免影响菌株的保存。
• 另外，保存的菌株需要定期检测活性，以确保其保存状态。

干燥保存法

干燥保存法是将微生物菌株通过脱水处理，使其处于休眠状态，达到长期保存的目的。干燥保存法的优点是保存方便、易于运输，常用于国际微生物菌株交换。

在干燥保存中，需要注意以下几点：

• 要选择合适的干燥剂，如硅胶、膨化土等。
• 保存过程中要避免潮湿，以免影响菌株的保存。
• 另外，保存的菌株需要定期检测活性，以确保其保存状态。

冷冻干燥法

冷冻干燥法是将微生物菌株在低温下冷冻，然后通过真空干燥处理，达到长期保存的目的。冷冻干燥法的优点是保存方便、易于运输，同时又能够保持菌株的活性，常用于保存难以保存的微生物菌株。

在冷冻干燥中，需要注意以下几点：

• 要选择合适的保藏液，如甘油、DMSO等。
• 保存过程中要避免温度波动，以免影响菌株的保存。
• 另外，保存的菌株需要定期检测活性，以确保其保存状态。

微生物菌种保藏是维护微生物资源的重要手段，合理选择合适的微生物菌种保藏方法，可以确保微生物菌株的长期保存和活性。在保存过程中，需要注意一些细节，以确保菌株的保存状态。

拓展百科知识：

• 甘油（gān?zhī?）：一种无色、无味、稠度较大的液体，具有保湿、防冻、防腐等作用。
• DMSO（dì?méi?suō?）：二甲基亚砜，一种无色透明的液体，具有良好的溶剂性和渗透性，常用于细胞冻存和组织保存。
• 真空干燥（zhēn?kōng?gān?zhào?）：将物质置于真空条件下，通过低温加热蒸发的方式将水分去除，达到干燥的目的。

参考文献：

• 丁晓光，谢洪波.微生物菌种保藏方法[J].微生物学通报，2024，40(8):1828-1834.
• 张小平，王伟民.微生物菌种保藏技术综述[J].微生物学杂志，2024，30(6):132-136.

相关问答拓展:

微生物菌种保藏方法？1、传代保藏传代保藏菌种是微生物保存中最常用的方法之一。很多微生物在低温或者干燥处理时，会很快死亡，为了保存菌种的活性，就要定期不断的进行菌种转接、培养后再保存。

2、斜面低温保藏将待保藏的菌种接种在合适的斜面培养基上，在相应的条件下培养至得到充足的菌体或者孢子，随后密封试管置于4℃左右保存，具体保存温度按照保存菌种设定。保藏时间依微生物的种类从1个月到4个月不等。

3、冷冻干燥保藏冷冻干燥保藏法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，这种方法适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年。我国大多数生物制品菌种都是采用该法保藏。

4、半固体穿刺保藏配制半固体培养基，高压湿热灭菌后倒于无菌试管中至约1/3，待培养基凝固，用接种环从平面培养基上挑取单菌落，穿入培养基若干次。在合适的条件下进行培养至菌体旺盛生长，之后密封试管，根据菌种特点在4℃左右或者凉爽干燥处保存。保存时间至少可以达到1年，对于有些菌种甚至能达到20年之久。

5、液氮超低温保藏液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内，将该安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。

6、冷冻真空干燥保藏将处于成熟期的微生物培养物悬浮于无菌的血清、卵白、脱脂奶或者海藻糖等保护剂中制成浓菌液，分装到无菌的安瓿瓶中，于低温冰箱中冷冻，达到预定温度后对浓菌液进行冷冻干燥处理，之后在真空状态下融封安瓿瓶，于20℃保藏。

7、蒸馏水保藏蒸馏水保藏菌种的方法普遍的应用于医学微生物、食品微生物和工业微生物中。将菌体悬浮于蒸馏水中，即可在室温下保存数年，此法应注意避免水分的蒸发。

长期保存菌种的方法？液体石蜡保存法

液体石蜡保存法就是在斜面菌种或穿刺菌种表面覆盖一层液体石蜡，从而隔绝空气，减少菌种及培养物水分挥发，保藏温度要求在4℃下即可。

将培养好的菌种斜面，缓慢倒入无菌的液体石蜡，使石蜡高出斜面顶端1厘米，直立放置，低温保存就可以，霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1-2年。

沙土保存法

沙土保藏法是将菌种吸附在适当的载体上，而后进行干燥的保藏。将培养好的菌种接入沙土管内，用真空泵抽气至干。细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。

甘油管保存法

甘油管保存是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。配置30%浓度的无菌甘油，将培养好的菌种与甘油充分混合均匀，放入-20℃保存。

冷冻干燥保藏法

冷冻干燥保存法就是将菌种与保护剂混合均匀后，快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分，兼具低温、干燥、除氧三方。干燥后的菌种在真空环境下可长期保存。常用的菌种保藏方法有哪些？

菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜面低温保藏法：将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。2、液体石蜡覆盖保藏法：使用液体石蜡将斜面菌覆盖住，使其和空气隔绝。

一、菌种保存的方法有哪些

1、斜面低温保藏法

（1）将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，等到菌种充分生长过后，使用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。

（2）如果是霉菌、放线菌及有芽孢的细菌，一般可以保存2-4个月左右，需要移种一次。如果是酵母菌，一般可以保存2个月左右，需要每个月移种一次。

2、液体石蜡覆盖保藏法

（1）将液体石蜡装在三角烧瓶中，并使用棉塞塞好，用牛皮纸进行包扎，然后在0.1MPa，121.3℃的环境下灭菌30分钟左右，接着将其放置在40℃的温箱之中，将水汽蒸发掉。

（2）将需要保藏的菌种，用适合的斜面培养基进行培养，得到健壮的孢子或者是菌体。

（3）使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出，注入斜面上，用量为高出斜面顶端1cm左右为宜。

（4）将试管直立，放置在低温或者是室温之下进行保存。

（5）霉菌、放线菌、芽孢细菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年，一般无芽孢细菌可以保藏1年，脑膜炎球菌可以保藏3个月左右（37℃环境下）。

3、沙土保藏法

（1）准备好河沙，加入10%稀盐酸，然后加热煮沸30分钟左右，将里面的有机质去掉，然后将酸水倒掉，用自来冲洗至ph为中性，接着烘干，过筛（40目筛子），去掉粗颗粒。

（2）准备好非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，浸泡洗涤数次，直至ph为中性，然后烘干，碾碎，过筛（100目筛子），去掉粗颗粒。

（3）将沙和土按照2：1的比例混合，装入试管或者是安瓿管中，塞好棉塞，在1212℃的环境下灭菌30分钟左右。

（4）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。

（5）使用灭菌过的吸管吸取菌悬液，然后均匀滴入沙土管中（0.2-0.5ml/管）。如果是放线菌或霉菌，可以直接挑取孢子拌入沙土管中。

（6）真空抽去沙土管中的水分。

（7）将沙土管用火焰熔封，然后存放在低温(4-6℃)干燥处保藏，或者是将沙土管用牛皮纸或塑料纸包好，放置在干燥器内保存。